1 Pozadina epidemije denge: Eskalacija globalnog izazova javnog zdravstva

Denga je akutna virusna bolest koju prenose komarci, a uzrokuje je virus denge (DENV), koji se pojavio kao najbrže šireća arbovirusna bolest u svijetu, predstavljajući značajnu prijetnju sigurnosti javnog zdravstva. Tijekom posljednja dva desetljeća, globalna incidencija denge dramatično se povećala, a broj prijavljenih slučajeva udvostručuje se godišnje od 2021. [1]. U prosincu 2023. Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) proglasila je globalnu izvanrednu situaciju zbog denge kako bi ojačala koordinirane međunarodne napore. Epidemiološke procjene WHO-a pokazuju da je otprilike 3,9 milijardi ljudi diljem svijeta u riziku od infekcije dengom, s procijenjenih 390 milijuna infekcija koje se događaju godišnje - od kojih se 96 milijuna prezentira kao klinički očiti slučajevi [1,2].

2 epidemiološka naglaska

Epidemiološke karakteristike denge oblikovane su interakcijom viroloških čimbenika, vektorske ekologije, imunološkog odgovora domaćina i socio-ekoloških uvjeta. Sveobuhvatno razumijevanje tih karakteristika ključno je za razvoj učinkovitih strategija prevencije i kontrole, kao i točnih dijagnostičkih pristupa.

2.1 Vektori prijenosa i obrasci prijenosa u urbanim područjima

Virus denge se prvenstveno prenosi putemAedes aegypti i Aedes albopictuskomarci. Među tim vektorskim vrstama, Aedes aegypti je prepoznat kao najvažniji vektor prijenosa, karakteriziran visokom „ljudskom prilagodljivošću“ i širokom rasprostranjenošću u tropskim i suptropskim urbanim okruženjima. Za razliku od drugih komaraca vektora arbovirusnih patogena, Aedes aegypti pokazuje sljedeće ključne epidemiološke karakteristike:

-Sklonost uzgoju u antropogenim okruženjima (npr. spremnici za vodu, odbačene gume)

-Snažan tropizam za ljudsku krv kao izvor hranjivih tvari

- Dnevno ponašanje pri hranjenju

Ove osobine definiraju dengu kao tipičnu„urbana zarazna bolest“,s učinkovitošću prijenosa značajno povećanom u gusto naseljenim područjima. Studije povezane s WHO-om pokazale su da u gusto naseljenim urbanim okruženjima povećana učestalost kontakta komaraca i ljudi može znatno povećati osnovni reprodukcijski broj (R₀) DENV-a, čime se ubrzava širenje epidemija [2].

2.2 Globalni trendovi širenja i pokretački čimbenici

Prema izvješćima WHO-a, globalni broj prijavljenih slučajeva denge eksponencijalno se povećao u posljednja dva desetljeća [1,3]. Ovaj uzlazni trend prvenstveno je potaknut sljedećim međusobno povezanim čimbenicima:

(1) Klimatske promjene: Rastuće globalne temperature ne samo da proširuju geografski raspon pogodnih staništa za komarce vektore, već i skraćuju vanjsko razdoblje inkubacije denge unutar komarca domaćina, čime se povećava učinkovitost prijenosa. SZO je potvrdila da su varijacije u gustoći komaraca uzrokovane klimom pouzdan prediktor prostorno-vremenske dinamike epidemija denge.

(2) Urbanizacija: Brzo i neplanirano širenje gradova stvorilo je obilna staništa za razmnožavanje komaraca vektora, dok je povećana gustoća naseljenosti ojačala kontinuitet lanaca prijenosa DENV-a.

(3) Globalno kretanje stanovništva: Međunarodna putovanja i trgovina olakšali su brzi prekogranični prijenos denga groznice, potičući prijelaz s uvezenih slučajeva na održivi lokalni prijenos. Podaci nadzora WHO-a pokazuju da su Sjedinjene Države između 2010. i 2021. prijavile 7528 slučajeva denga groznice povezanih s putovanjima, među kojima je 3135 zahtijevalo hospitalizaciju, a 19 je rezultiralo smrtnim ishodom.

(4) Širenje rasprostranjenosti vektora: Globalno, geografski raspon Aedes aegypti i Aedes albopictus nastavlja se širiti, a komarci Aedes se sve više naseljavaju u dijelovima Europe. Posljedično, denga se razvila od tradicionalno regionalne epidemije do globalne prijetnje javnom zdravlju.

2.3 Mehanizmi ko-cirkulacije više serotipova i reinfekcije

Virus denge sastoji se od četiri antigenički različita serotipa (DENV-1 do DENV-4). Infekcija jednim serotipom daje dugoročni zaštitni imunitet protiv tog specifičnog serotipa, ali samo privremenu i djelomičnu unakrsnu zaštitu protiv ostala tri serotipa. Opća populacija je univerzalno osjetljiva na DENV, a samo podskupina zaraženih osoba razvija kliničku bolest [2].

U endemskim regijama, više serotipova DENV-a često istovremeno cirkulira, što rezultira mogućnošću da pojedinci dožive više infekcija denga groznicom tijekom svog života. Epidemiološke studije WHO-a identificirale su ko-cirkulaciju više serotipova kao ključni pokretač periodičnih izbijanja denga groznice [1].

2.4 Sekundarna infekcija i pojačanje ovisno o antitijelima

Kritičan i jedinstven fenomen u epidemiologiji denge jepojačanje ovisno o antitijelima (ADE)Tijekom sekundarne infekcije heterolognim DENV serotipom, neneutralizirajuća antitijela proizvedena tijekom primarne infekcije olakšavaju ulazak virusa u monocite i makrofage, čime se pojačava replikacija virusa. Ovaj mehanizam je široko prepoznat od strane WHO-a kao glavni patogeni faktor u teškoj dengi, uključujući hemoragijsku dengu i sindrom denge šoka [1].

Epidemiološki podaci WHO-a dosljedno pokazuju da osobe sa sekundarnom infekcijom denga groznicom imaju značajno veći rizik od razvoja teške bolesti u usporedbi s onima s primarnom infekcijom - karakteristika koja je od velikog značaja za nadzor bolesti i kliničko liječenje. Važno je napomenuti da, iako je rizik od teške bolesti povećan tijekom sekundarne infekcije, infekcija bilo kojim serotipom DENV-a može potencijalno napredovati do teške denga groznice [1].

2.5 Nespecifične kliničke manifestacije i rizik od pogrešne dijagnoze

Kliničke manifestacije denge su izrazito nespecifične, posebno u ranim fazama bolesti, često se preklapajući s onima drugih virusnih infekcija koje prenose komarci (npr. virusi chikungunya i Zika), kao i određenih respiratornih infekcija. Procjene WHO-a pokazuju da je 40-80% DENV infekcija asimptomatsko [3].

Tipične kliničke manifestacije uključuju:

-Akutna vrućica (traje 2-7 dana, može biti dvofazna)

- Jaka glavobolja i retroorbitalna bol (bol iza očiju)

- Bol u mišićima i zglobovima (obično poznata kao "groznica prijeloma kostiju")

- Makularni ili makulopapularni osip

- Blage hemoragijske manifestacije (npr. ekhimoza, epistaksa, krvarenje desni)

Simptomatska denga groznica obično se dijeli u tri različite faze: febrilnu fazu, kritičnu fazu i fazu oporavka. Otprilike manje od 5% simptomatskih pacijenata napreduje do teške denge. Zbog nedostatka specifičnih kliničkih značajki, dijagnoza temeljena isključivo na kliničkim simptomima je teška, što povećava rizik od pogrešne dijagnoze i nedovoljne dijagnoze. WHO izričito naglašava da sama klinička dijagnoza nije dovoljna za osiguranje točnosti, što laboratorijsku potvrdu čini neophodnom [1].

 3 ključne točke iz dokumenta WHO „Laboratorijsko testiranje na virus denge: Privremene smjernice, travanj 2025.“

U travnju 2025. Svjetska zdravstvena organizacija objavila je ažurirane privremene smjernice o laboratorijskom testiranju na dengu, pružajući mjerodavne tehničke smjernice za globalnu dijagnozu denge. Ove smjernice sintetiziraju najnovije dokaze o laboratorijskom testiranju denge u kontekstu tekuće globalne izvanredne situacije s dengom i nude praktične preporuke prilagođene okruženjima s različitim razinama resursa.

3.1 Temeljna načela strategije testiranja

Smjernice naglašavaju da dijagnoza denge groznice mora usvojiti strategiju kombiniranog testiranja s više markera na temelju stadija bolesti [1]. S obzirom na nedostatak univerzalnog dijagnostičkog algoritma, strategije testiranja trebale bi se prilagoditi lokalnim epidemiološkim kontekstima, uzimajući u obzir sljedeće ključne čimbenike [1]:

- Stadij infekcije: Broj dana nakon pojave simptoma određuje najprikladniju metodu testiranja

-Vrsta uzorka: Prikladnost pune krvi, plazme ili seruma za detekciju DENV-a

-Regionalna epidemiologija: Lokalno cirkulirajući serotipovi DENV-a i ko-cirkulacija drugih arbovirusa

-Rizik od koinfekcije: U regijama s preklapajućom cirkulacijom arbovirusa, treba razmotriti multipleks testiranje kako bi se razlikovali različiti patogeni

3.2 Strategija testiranja temeljena na fazama

Prema smjernicama WHO-a, laboratorijsko testiranje denge treba slijediti jasne vremenske okvire na temelju stadija bolesti [1,2]:

(1) Testiranje akutne faze (≤7 dana nakon početka)

-Testiranje nukleinskih kiselina (molekularno testiranje): Lančana reakcija polimeraze reverzne transkripcije (RT-PCR) i druge molekularne metode detektiraju DENV RNA s visokom osjetljivošću.

-Testiranje antigena: detekcija NS1 antigena, koji postaje detektibilan unutar 1-3 dana nakon početka bolesti.

Tijekom akutne faze, razine viremije su relativno visoke, a testiranje nukleinskih kiselina i antigena postiže optimalnu osjetljivost.

(2) Testiranje u fazi oporavka (≥4 dana nakon početka)

-Serološko testiranje: IgM antitijela obično postaju detektirana oko 4. dana nakon početka bolesti.

U većini slučajeva, IgM antitijela perzistiraju 14-20 dana, a u nekim slučajevima perzistencija može potrajati i do 90 dana.

Testiranje IgG antitijela ima ograničenu vrijednost za dijagnozu akutne denge zbog potencijalnih unakrsno reaktivnih antitijela od prethodne infekcije flavivirusom ili cijepljenja.

(3) Algoritam za dijagnostiku sumnjivih slučajeva

Smjernice uključuju dijagnostički algoritam za sumnjive slučajeve denge, preporučujući odgovarajuće metode testiranja na temelju dana nakon pojave simptoma: testiranje NS1 antigena i testiranje nukleinskih kiselina primarni su pristupi u ranoj fazi, dok je serološko testiranje primarna metoda u kasnijoj fazi.

3.3 Evaluacija i odabir učinkovitosti metode ispitivanja

Prema WHO-u, sustavna evaluacija učinkovitosti i primjenjivi scenariji različitih testova na dengu su sljedeći:

4 Preporuke za makro i mikrotestiranje proizvoda za detekciju denge po scenariju

Kako bi podržao prevenciju i kontrolu denge, Macro & Micro-Test pruža integrirani dijagnostički portfelj koji obuhvaća brzi probir, molekularnu potvrdu i genomski nadzor, zadovoljavajući potrebe u različitim fazama upravljanja epidemijom.

4.1 Scenarij 1: Brzi probir i ciljani nadzor

Primjenjivo u klinikama za povišenu temperaturu, ustanovama primarne zdravstvene zaštite, probiru u zajednici za vrijeme izbijanja epidemije i karanteni u lukama/na granicama.

-Brzi test za antigen virusa denge NS1: Otkriva ranu infekciju (1-3 dana nakon početka) s rezultatima za 15 minuta za brzu trijažu.

-Test antitijela IgM/IgG protiv virusa denge: Razlikuje primarne/sekundarne infekcije kako bi se procijenio rizik od teške bolesti.

- Kombinirani brzi test za antigen NS1 virusa denge + IgM/IgG: Istovremeno otkriva antigen i antitijela za potpunu dijagnozu.

-Test antitijela IgM/IgG na virus čikungunje: Omogućuje diferencijalnu dijagnozu s dengom kako bi se točno identificirali patogeni.

4.2 Scenarij 2: Precizna dijagnoza i hitni odgovor

-Komplet za detekciju nukleinskih kiselina virusa denge I/II/III/IV: Detektira i razlikuje 4 serotipa (granica detekcije 500 kopija/mL) za praćenje epidemije.

-Liofilizirani PCR komplet za virus denge: Može se prenositi na sobnoj temperaturi, pogodan za područja s ograničenim resursima i iznenadne epidemije.

-Dengue/Zika/Chikungunya Multiplex PCR komplet u stvarnom vremenu: Istovremeno detektira 3 arbovirusa za učinkovitu diferencijalnu dijagnozu u složenim epidemijama.

Svi gore navedeni reagensi kompatibilni su s potpuno automatiziranim sustavom za određivanje uzorka do odgovora AIO 800, što smanjuje ručni rad i unakrsnu kontaminaciju te poboljšava učinkovitost i biosigurnost.

4.3 Scenarij 3: Genomski nadzor i analiza virusne loze

Primjenjivo na nacionalne referentne laboratorije, istraživačke institucije javnog zdravstva, u skladu s pozicioniranjem NGS-a od strane WHO-a.

Macro & Micro-Testova rješenja za genomski nadzor podržavaju sekvenciranje cijelog genoma za praćenje virusa, razjašnjenje lanca prijenosa, praćenje varijanti i prilagodbu strategije cijepljenja. Podržavaju ručne/automatizirane tijekove rada, poboljšavajući protok i ponovljivost, omogućujući laboratorijima da prijeđu s rutinskog testiranja na napredni nadzor, u skladu s naglaskom WHO-a na jačanju praćenja evolucije virusa.

4.4 Vrijednost integriranih rješenja

Macro & Micro-Test pruža cjelovita dijagnostička rješenja za otkrivanje arbovirusa, podržavajući svaku fazu upravljanja epidemijama: alate za brzi probir za zdravstvene ustanove na prvoj crti, molekularnu potvrdu za preciznu dijagnozu i mogućnosti analize cijelog genoma za epidemiološki nadzor. S visokoučinkovitim testovima, fleksibilnim tijekovima rada i platformama spremnim za automatizaciju, ova rješenja osnažuju laboratorije i javnozdravstvene sustave da ojačaju spremnost i odgovor na nove arbovirusne prijetnje diljem svijeta.

Reference

[1] Svjetska zdravstvena organizacija. Laboratorijsko testiranje na virus denge: Privremene smjernice, travanj 2025. Ženeva: Svjetska zdravstvena organizacija; 2025.

[2] Tehnička savjetodavna skupina Globalne inicijative za arboviruse SZO-a. Jačanje globalne spremnosti i odgovora na prijetnje arbovirusnim bolestima: Poziv na djelovanje. Lancet Infect Dis. 2026;26(1):15-17.

[3] The Lancet Microbe. Prevladavanje dileme dijagnostike denge. Lancet Microbe. 2025;6(7):101190.